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主页 &amp;gt; 技术服务 &amp;gt; AccuITSTM真菌绝对定量测序检测

AccuITSTM真菌绝对定量测序

AccuITSTM真菌绝对定量测序检测

服务介绍:

  微生物广泛存在于人类、动物、植物及生态环境中,它们在人类和动物的疾病、生物化学养分循环、植物营养及生态环境等方面调节中存在极其重要的影响。近年来,qPCR绝对定量和常规扩增子测序技术的联合使用成为获得细菌绝对丰度和微生物群落结构的主要研究手段。qPCR绝对定量技术是对样品目的基因进行qPCR检测,根据已知起始拷贝数的标准品做出标准曲线,计算样品总菌绝对拷贝数,然后结合常规扩增子测序得出的各物种相对丰度,计算出物种对应的绝对丰度。该方法将“扩增子测序”与“定量”完全割裂开来,优势在于实验灵活,可有选择地对样本进行绝对定量分析。但qPCR 绝对定量技术对样品质量要求较高,尤其对PCR抑制剂敏感,而这却是土壤/肠道等微生物研究的主要对象无法规避的问题,所以,常规的qPCR绝对定量实验不再适用于组成较为复杂的环境样本微生物绝对定量。
  由于上述方法的局限性,如何将微生物群落结构和微生物绝对定量有机结合起来从而同时获得微生物群落结构和物种绝对拷贝数是目前微生物研究领域的一个技术趋势,同时对样本微生态的分析研究工作更具有重大意义。微生物扩增子绝对定量测序技术是一种能够将qPCR绝对定量技术和常规扩增子测序技术完美合二为一的技术。该方法通过向样品DNA中添加一定量spike-in standards人工合成序列,进行ITS扩增子文库构建、测序,再根据spike-in standards 的ITS扩增子reads数及其绝对拷贝数绘制标准曲线,计算出样品中OTU代表序列对应真菌物种绝对拷贝数。
  在2019年,公司成功推出了细菌16S绝对定量产品,市场反响热烈,累计至今项目已超过百余项。在实际的项目洽谈中我们发现,有很多老师更关心真菌而不是细菌菌落组成及丰度,有的则是以真菌与细菌为共同的研究对象,来探讨它们之间的互作关系,这些老师都要求检测真菌的绝对定量。我们克服了诸如样本真菌ITS拷贝数通常较低、非特异片段扩增较多、实验稳定性与准确性要求更高等技术难点,成功研发了AccuITSTM真菌绝对定量测序技术。

技术参数及分析内容

技术优势:

  • 数据量大:平均10万reads/样品,可检测环境微生物群落中的痕量菌,以及发现新的微生物。
  • 方案经济便捷:单个真菌ITS扩增子测序可同时获得环境样本中微生物的组成信息和绝对定量数据。
  • 适用范围广:运用真菌绝对定量可同时得到环境样本中绝大多数优势真菌物种的绝对定量数据,该方法具有普遍适用性。
  • 真实、准确:绝对定量数据,测序结果真实,客观还原菌群结构及丰度比例,无样品偏差可直接比较。

技术优势:

  • 微生物菌种绝对定量
  • 微生物菌群进化分析
  • 微生物菌群丰度分析
  • 环境与生态研究

技术参数


技术路线图



服务流程



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